博檢革蘭氏陰性細菌鑒定係統使用說明 青島betway必威西汉姆联生物技術有限公司
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本係統通過21種生化測試，配合標準數據庫，可對革蘭氏陰性細菌的歸屬進行鑒定。

原理

  不同種屬的細菌具有不完全相同的生化特征。本係統選取21種典型生化試驗，並把生化反應的結果轉換為一個8進製數，通過提供的標準數據庫查詢係統可得到實驗菌株歸屬的相對概率、T值和R值，對菌株的歸屬進行一定程度的鑒定。

生化管
  本係統含20種生化管及一個氧化酶試紙條，分別為ONPG、精氨酸（ADH）、賴氨酸（LDH）、鳥氨酸（ODC）、檸檬酸鹽利用實驗（CIT）、產硫化氫試驗（H2S）、脲酶（URE）、乳糖（LAC）、吲哚（IND）、VP、明膠（GEL）、葡萄糖（GLU）、甘露醇（MAN）、肌醇（INO）、山梨醇（SOR）、鼠李糖 （RHA）、蔗糖（SAC）、蜜二糖（MEL）、苦杏仁甙（AMY）、阿拉伯糖（ARA）、氧化酶（OX）。

附品
  1張記錄卡
  1份使用說明書

所需試劑及儀器
  儀器：1根接種環、2個100ul無菌槍頭、1支100ul移液器、混勻器、酒精燈、冰箱、培養箱、記號筆。
  試劑：1套VP試劑、1支Kovacs氏靛基質試劑 1支液體石蠟 1支0.85%NaCl生理鹽水
  建議使用betway必威西汉姆联公司產品
  其它：1個營養瓊脂或胰蛋白腖大豆瓊脂平板

存儲
  2～8℃，避光保存，並在有效期內使用。
  為保證實驗的有效性，實驗應在無菌環境下進行

1.準備
  1.1 從2-8℃避光環境中取出試劑盒。
  1.2 開啟包裝盒，輕輕抖動使培養基落入槽的下部；
  1.3 使用酒精棉將產品表麵的錫箔以及蓋子上的刺頭擦拭殺菌。將蓋子上的刺頭翻轉並在培養基上放的錫箔上紮空。
  1.4 取出在避光紙保藏中的氧化酶試紙條，使用移液器滴加100ul0.85%NaCl溶液於紙條一端，挑取待測菌新鮮菌苔塗抹落於浸濕的紙條上，2分鍾內觀察並記錄結果。
  1.5 使用接種環從預先準備好的營養瓊脂或胰蛋白腖大豆瓊脂平板上挑取適量菌苔於生理鹽水中，在混勻器上當混勻，製備菌懸液。

2.接種
  2.1 使用移液器向每支生化管中加入100ul製備好的菌懸液。
  2.2 檸檬酸鹽利用實驗（CIT）為固體斜麵培養基，菌懸液需沿斜麵加入。
  2.3 吸取200ul液體石蠟覆蓋ADH、LDH、URE和ODC。
  2.4 35～37℃恒溫培養18～24小時。

3.結果判讀
  3.1 VP試驗：取出試劑盒，向VP管內滴加1滴VP甲液和3滴VP乙液後，置於35～37℃恒溫培養箱繼續培養30分鍾後取出，培養基變為紅色表明為陽性反應。
  3.2 IND試驗：滴加2～4滴Kovacs氏靛基質試劑,兩分鍾內出現粉紅色環表明為陽性反應。

表1：博檢革蘭氏陰性菌鑒定係統判讀表
培養基 陽性（+） 陰性（-） 培養基 陽性（+） 陰性（-）
ONPG LAC GLU MAN
INO SOR RHA
SAC MEL AMY
ARA

ADH LDH ODC ADH LDH ODC
CIT
H2S VP
URE GEL
IND OX
注：對糖醇類生化反應管而言，若安瓿瓶底部呈黃色上部呈綠色也應判為陽性。

4.編碼
  4.1以表2為例，將細菌各項生化反應結果填入附贈的記錄卡中，依次每三項為一組，若這三項反應均為陽性，則分別記為1、2、4，若為陰性，則相應項記為0。將每組三項的數值相加，共七組，組成一個七位數。
  4.2將所得七位數輸入數據庫係統中即可進行查詢。
  4.3若某項生化反應結果較難判斷，則按照陰性進行記錄，但查詢時，應在不定的生化反應前打鉤。

5.注意事項
  5.1鑒定係統采用一次性材料生產而成，使用後請高壓滅菌。
  5.2本係統目前僅用於革蘭氏陰性細菌。
  5.3係統數據庫將隨時更新，不斷擴大鑒定範圍。

表2：博檢革蘭氏陰性細菌鑒定係統記錄卡使用示例

樣品來源(菌種編號):大腸埃希氏菌ATCC25922   時間:09.02.09   實驗人:青島betway必威西汉姆联生物

第一組

第二組

第三組

第四組

第五組

第六組

第七組

ONPG

ADH

LDH

ODC

CIT

H2S

URE

LAC

IND

VP

GEL

GLU

MAN

INO

SOR

RHA

SAC

MEL

AMY

ARA

OX

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

 1

2

4

+

-

+

+

-

-

-

+

+

-

-

+

+

-

+

+

-

+

 -

+

-

1

0

4

1

0

0

0

2

4

0

0

4

1

0

4

1

0

4

 1

2

0

5

1

6

4

5

5

2

檢索結果:大腸埃希氏菌   id%=98.93%   T=0.99   R=191.72 很好的鑒定結果

6.質量控製

ONPG ADH LDH ODC CIT H2S URE LAC IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX
大腸埃希氏菌 ATCC25922   5164552
+ - + + - - - + + - - + + - + + - + - + -
霍亂弧菌 非O1群
+ - + + + - - - + + + + + - - - + - + - +
奇異變形杆菌 ATCC12453   05(7)14(6)00(2)0
- - - + V + + - - - V + - - - - V - - - -
肺炎克雷伯氏菌 ATCC35657   522(3)4(5)773
+ - + - + - V + - V - + + + + + + + + + -
粘質沙雷氏菌 ATCC14041   5307721
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