改良羅氏培養基基礎

用途:用於結核杆菌的分離培養。

成分(g/ 600ml)：

磷酸二氫鉀	2.4
硫酸鎂	0.24
檸檬酸鎂	0.6
L-穀氨酸鈉	7.2
孔雀綠	0.4
馬鈴薯澱粉	30.0

用法

稱取本品49.84g,並吸取甘油12ml,加熱攪拌溶解於 600ml蒸餾水中,煮沸5-10分鍾,121℃高壓滅菌15分鍾取出。待冷至55℃左右時,以無菌操作加入無菌攪勻的全蛋液1000ml,混勻 ( 避免產生氣泡 ),分裝18mm×180mm試管,每管7ml,置成長斜麵 ,用 85-90℃流動蒸汽 1-1.5小時後,取出,放冷,備用。

注：培養基中含較多馬鈴薯澱粉，呈渾濁狀。

用法詳解：

（1）基礎培養基：稱取除全蛋液以外的成分加熱煮沸溶解於600mL純化水中，加熱過程需不停攪拌以防止馬鈴薯粉凝成塊或糊底，121℃滅菌15min，冷卻至55℃備用；

（2）全蛋液製備：將新鮮雞蛋洗刷外殼後，浸於5%碳酸鈉溶液中約30min，用清水衝洗後，浸泡於75%乙醇溶液中數分鍾，在無菌環境中用滅菌的鑷子或其他器具打破蛋殼，將蛋液倒入含玻璃珠的無菌錐形瓶中（可預先將玻璃珠放入錐形瓶中，121℃高壓蒸汽滅菌15-30min），充分搖晃使蛋黃、蛋白搖散混合均勻。

注：新鮮雞蛋內的蛋液通常是無菌的，無須進行滅菌處理，操作過程應注意避免汙染。若蛋液中可能殘存蛋殼碎渣，可將打散後的全蛋液用無菌紗布進行過濾。

（3）將1000mL全蛋液與600mL基礎溶液混合充分搖勻，無菌分裝於滅菌的試管中，每管5-7mL（視試管的大小調整裝量），擺長斜麵，用85-90℃流動蒸汽滅菌1-1.5h至斜麵完全凝固，取出冷卻後備用。製備好的羅氏培養基斜麵應呈微綠色或黃綠色。

注：不同於一般的培養基，此培養基中不使用瓊脂，而是通過蛋液的凝固效果製成固體培養基，因此硬度較低，且分枝杆菌生長周期長，為防止培養基過分失水變幹，通常使用試管製成斜麵使用而不是做成平板（平板通常培養3-5天後會有明顯失水變薄現象，而分枝杆菌通常需要培養數周的時間）。將蛋液與基礎培養基混合時，應緩慢倒入輕輕搖勻，防止產生過多氣泡。85-90℃的流動蒸汽可以保持蛋液中的維生素不被破壞，也可使用凝固器加溫至85-90℃，若無流動蒸汽滅菌器和凝固器，也可使用烘箱調節至85-90℃使培養基凝固。

改良羅氏培養基基礎（GB）微生物靈敏度試驗:

按標簽用法製備培養基，接種以下質控菌株，放置36±1℃需氧培養14-28天。

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