羅氏培養基斜麵管製備方法及注意事項

一、用途及原理

  羅氏培養基常用於培養分枝杆菌，特別是用於結核分枝杆菌的分離培養及卡介苗的傳代和保存。結核分枝杆菌為專性需氧菌，營養要求較高，能耐酸，最適生長pH為6.5-6.8，生長緩慢，必須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油及某些無機鹽類的特殊培養基上才能生長。羅氏培養基中的全蛋液營養豐富，可促進分枝杆菌快速生長，培養基中的孔雀綠可抑製部分雜菌的生長。

二、培養基配方

  注：由痰等標本中分離分枝杆菌時，若前處理方法為堿性物質，可將培養基中的磷酸二氫鉀由2.4g增加至14g，即可製成酸性羅氏培養基；若前處理方法為酸性物質，可將培養基中的2.4g磷酸二氫鉀改為3.6g磷酸氫二鉀，即可製成堿性羅氏培養基。

三、配製方法

  （1）基礎培養基：稱取除全蛋液以外的成分加熱煮沸溶解於600mL純化水中，加熱過程需不停攪拌以防止馬鈴薯粉凝成塊或糊底，121℃滅菌15min，冷卻至55℃備用；

  （2）全蛋液製備：將新鮮雞蛋洗刷外殼後，浸於5%碳酸鈉溶液中約30min，用清水衝洗後，浸泡於75%乙醇溶液中數分鍾，在無菌環境中用滅菌的鑷子或其他器具打破蛋殼，將蛋液倒入含玻璃珠的無菌錐形瓶中（可預先將玻璃珠放入錐形瓶中，121℃高壓蒸汽滅菌15-30min），充分搖晃使蛋黃、蛋白搖散混合均勻。

  注：新鮮雞蛋內的蛋液通常是無菌的，無須進行滅菌處理，操作過程應注意避免汙染。若蛋液中可能殘存蛋殼碎渣，可將打散後的全蛋液用無菌紗布進行過濾。

  （3）將1000mL全蛋液與600mL基礎溶液混合充分搖勻，無菌分裝於滅菌的試管中，每管5-7mL（視試管的大小調整裝量），擺長斜麵，用85-90℃流動蒸汽滅菌1-1.5h至斜麵完全凝固，取出冷卻後備用。製備好的羅氏培養基斜麵應呈微綠色或黃綠色。

  注：不同於一般的培養基，此培養基中不使用瓊脂，而是通過蛋液的凝固效果製成固體培養基，因此硬度較低，且分枝杆菌生長周期長，為防止培養基過分失水變幹，通常使用試管製成斜麵使用而不是做成平板（平板通常培養3-5天後會有明顯失水變薄現象，而分枝杆菌通常需要培養數周的時間）。將蛋液與基礎培養基混合時，應緩慢倒入輕輕搖勻，防止產生過多氣泡。85-90℃的流動蒸汽可以保持蛋液中的維生素不被破壞，也可使用凝固器加溫至85-90℃，若無流動蒸汽滅菌器和凝固器，也可使用烘箱調節至85-90℃使培養基凝固。

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