操作視頻|綠膿菌素測定實驗
用途:用於銅綠假單胞菌(綠膿杆菌)的綠膿菌素測定試驗。
包裝方式:玻璃管裝13ml,螺旋口,單支獨立包裝,更防漏,免汙染
主要成分:蛋白腖、氯化鎂、硫酸鉀、瓊脂、甘油、蒸餾水等
檢驗原理: 蛋白腖和甘油提供碳氮源;氯化鎂和硫酸鉀促進綠膿色素和熒光素的產生;瓊脂是培養基的凝固劑。
使用說明:
用接種針(環)挑取待測菌落,在PDP斜麵上“之”字形劃線接種,置於36±1℃培養24±2h或標準規定的條件下進行培養。培養結束後,向試管中加入3-5mL三氯甲烷,,充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解於三氯甲烷液內,待三氯甲烷提取液呈藍色時,用吸管將三氯甲烷移到另一試管中並加入1mol/L的鹽酸1mL左右,振蕩後,靜置片刻。如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時,即綠膿菌素試驗結果為陽性。
綠膿菌素生成試驗方法及原理:
方法:挑取可疑菌落接種在在綠膿菌素測定用培養基(PDP)斜麵上,培養24小時,觀察斜麵有無色素。如有色素,在試管內加氯仿3.0~5.0mL,充分震搖,使培養物中的綠膿菌素提取在氯仿中,待氯仿提取液呈現綠色時,加1mol/L鹽酸約1mL,震搖後靜置片刻,上層鹽酸溶液中呈現粉紅至紅色實驗結果為陽性,否則為陰性。
原理:銅綠假單胞菌能產生的綠膿菌素能被氯仿提取,且在水中溶解度比氯仿大,並且會發生可逆的氧化還原反應,氧化時堿性呈藍色,酸性呈紅色。所以加入鹽酸溶液並震搖後,綠膿菌素會由氯仿轉移至鹽酸溶液中,並在酸性環境中呈紅色。
注意事項:
1.使用前應觀察培養基外觀是否正常,若出現試管破碎、培養基變色、幹裂或汙染等異常現象時,則不能使用。 2.本產品為保證產品的穩定性及無菌性,采用了密封的螺旋試管蓋。在接種培養過程中,嚴禁擰緊試管蓋,建議更換為透氣的矽膠塞或者使用脫脂棉封口,保證良好的透氣性。銅綠假單胞菌為嚴格需氧型細菌,密閉培養會導致綠膿菌素產生不足,出現假陰性結果。 3.使用三氯甲烷提取綠膿菌素時,通常浸泡5-10min即可,若效果不明顯,也可延長浸泡時間或用玻璃棒搗碎培養基斜麵後浸泡。 4.三氯甲烷為管製品,具有一定的危險性,且易揮發,提取綠膿菌素時應在通風櫥操作,做好防護措施。同時由於三氯甲烷可溶解塑料,因此操作時應使用玻璃材質的吸管和試管對三氯甲烷進行轉移和存放。
不同細菌在綠膿菌素測定用培養基管(PDP)中的生化反應:
綠膿菌素測定培養基管(PDP)微生物靈敏度試驗:
按標簽用法製備培養基,接種以下質控菌株,放置35℃需氧培養24小時。
相關資料:
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