改良克氏雙糖鐵培養基原理及現象

一、用途及原理

 用於細菌的複合生化試驗鑒定（葡萄糖、山梨醇），常用於小腸結腸炎耶爾森氏菌生化鑒定。

 蛋白腖、酵母浸粉、牛肉浸粉提供細菌生長所需的基本營養；氯化鈉維持滲透壓，山梨醇和葡萄糖為可發酵碳源，硫酸亞鐵和硫代硫酸鈉可檢測細菌是否產硫化氫，瓊脂為凝固劑，酚紅為酸堿指示劑，酸性條件下呈黃色，堿性條件下呈紅色。

 培養基中含有少量的葡萄糖（1g/L）和較多的山梨醇（20g/L）兩種碳源，若細菌僅能發酵葡萄糖而不能發酵山梨醇，在培養基中產酸較少，在斜麵處的酸受空氣氧化生成堿性物質，pH較高顯紅色，底層少量酸不被氧化，pH下降顯黃色；若細菌能發酵山梨醇，在培養基中產生大量酸，整個培養基pH下降，斜麵和底層均顯黃色。若細菌僅能氧化利用葡萄糖或不能利用葡萄糖，則培養基斜麵和底層均為紅色。若細菌分解葡萄糖或山梨醇產氣，可觀察到氣泡或斷層現象。產硫化氫細菌可還原硫代硫酸鈉、硫酸亞鐵生成硫化氫，與培養基中亞鐵離子反應生成黑色的硫化亞鐵，可觀察到底層變黑。

二、培養基配方（g/L）

蛋白腖	15.0
酵母浸粉	3.0
牛肉浸粉	3.0
月示蛋白腖	5.0
氯化鈉	5.0
山梨醇	20.0
葡萄糖	1.0
硫酸亞鐵	0.2
硫代硫酸鈉	0.3
瓊脂	13.0
酚紅	0.024
pH7.4±0.2	25℃

三、使用方法及注意事項

 1.稱取本品65.52g，加熱攪拌溶解於1000ml蒸餾水中，分裝至試管，121℃高壓滅菌15分鍾。

 注：分裝前要保證瓊脂溶解充分，否則分裝後的試管可能不凝固。

 2.滅菌結束後，趁熱將培養基擺高層斜麵（斜麵:底層=2:3），凝固後備用。

 3.接種：用接種針挑取待測菌菌落，在斜麵“之”字形劃線並穿刺底層，置於相應溫度下培養。

 注：培養基斜麵需要與氧氣充分發生反應，因此培養過程中試管必須確保使用透氣性良好的塞子，嚴禁密閉培養，否則可能導致試驗結果不正確。

 4.結果觀察及記錄：培養結束後，記錄斜麵及底層的顏色（通常紅色代表產堿，用“K”表示，黃色代表產酸，用“A”表示）、是否出現斷層及變黑現象。

四、試驗現象與解釋

 接種以下質控菌株，在25±1℃需氧培養24小時：

 改良克氏雙糖鐵試驗現象：

 試驗現象解釋：

 鼠傷寒沙門氏菌可發酵葡萄糖產酸產氣，並發酵山梨醇產酸，產硫化氫，可觀察到培養基整體顯黃色，有斷層，底部有變黑；

 普通變形杆菌可發酵葡萄糖產酸產氣，但不能發酵山梨醇產酸，產硫化氫，可觀察到培養基斜麵紅色，底層黃色並有變黑，有斷層；

 小腸結腸炎耶爾森氏菌可發酵葡萄糖和山梨醇產酸，但不產氣，不產硫化氫，可觀察到培養基整體顯黃色，無斷層，底層不變黑；

 福氏誌賀氏菌發酵葡萄糖產酸不產氣，不能發酵山梨醇，不產硫化氫，可觀察到培養基斜麵紅色，底層黃色不變黑，無斷層。

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