血瓊脂培養基基礎的選用和平板製作注意事項

一、簡介

  血瓊脂平板培養基英文名稱：Blood Agar，又叫做血平板、血平皿，是一種富含動物血液成分的瓊脂平板，常用於微生物學實驗中檢測不同細菌對血液成分的反應；血瓊脂平板通常由瓊脂、肉湯、羊血或牛血等成分組成，其中的蛋白腖和牛肉粉主要提供細菌生長所需要的碳源、氮源、氨基酸及維生素；氯化鈉維持培養基中的滲透壓，瓊脂用做凝固劑。脫纖維羊血一方麵提供一些特殊的生長因子，另一方麵用於觀察溶血反應。

  血瓊脂平板可以用於分離和鑒定許多不同類型的微生物，如溶血性鏈球菌、李斯特氏菌、弧菌、金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢杆菌等。

二、溶血現象

  有關不同細菌在血瓊脂平板上的溶血情況，可參考微生物特征圖庫。舉例如下：

（1）肺炎鏈球菌的α溶血和乙型溶血性鏈球菌的β溶血，α溶血又稱草綠色溶血，菌落周圍會形成草綠色的溶血環，β溶血又稱完全溶血，菌落周圍會形成透明的溶血環。

（2）各種李斯特氏菌的溶血及協同溶血情況。伊氏李斯特氏菌、斯氏李斯特氏菌和單增李斯特氏菌呈現完全溶血現象，英諾克李斯特氏菌無溶血現象；伊氏李斯特氏菌靠近馬紅球菌溶血增強，單增李斯特氏菌靠近馬紅球菌和金黃色葡萄球菌落血均增強。

（3）我妻氏培養基上弧菌的溶血情況：副溶血性弧菌（ATCC 33847）菌落周圍有透明的β溶血環，溶藻弧菌菌落周圍無溶血環。

  （4）金黃色葡萄球菌的溶血情況：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）菌落周圍呈現完全溶血。

三、血瓊脂基礎的選擇

  實際工作中，可根據要求選擇不同的血瓊脂基礎，如營養瓊脂、豆粉瓊脂或哥倫比亞瓊脂（用於營養要求較高的細菌的培養及溶血試驗）等，加蒸餾水溶解後高壓滅菌。冷卻至50℃～55℃，加入一定量的血液，緩慢混勻後傾注平板。

  通常來說，如果隻是想看一下溶血情況，隻要用最基本的營養性瓊脂，加入脫纖維羊血製成平板使用即可。但《GB 4789 食品安全國家標準  食品微生物學檢驗》係列標準中，針對不同細菌檢驗時，所規定的血瓊脂的基礎配方又有所不同：

（1）《GB 4789.10-2016 金黃色葡萄球菌檢驗》中，所用的血瓊脂平板基礎配方為：豆粉瓊脂，添加的是脫纖維羊血或兔血。

  豆粉瓊脂的具體配方如下：（g/L）

（2）《GB 4789.14-2014 蠟樣芽孢杆菌檢驗》中，所用的血瓊脂為：胰酪腖大豆羊血（TSSB）瓊脂，添加的是脫纖維羊血。

（3）《GB 4789.30-2016 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗》中，所用的血瓊脂基礎配方如下圖，添加的是脫纖維羊血。

（4）《GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌檢驗》中，做副溶血性弧菌神奈川試驗所用的血瓊脂為我妻氏血瓊脂，配方如下圖，添加的是新鮮洗滌的人或兔紅細胞。

（5）《GB 4789.11-2014 β型溶血性鏈球菌檢驗》中，做β型溶血性鏈球菌分離所用的血瓊脂為哥倫比亞CNA血瓊脂，而進行鑒定所用的血瓊脂為哥倫比亞血瓊脂，各自的配方如下：

四、產品選擇

  由於各個標準中規定的血瓊脂基礎不同，在做血瓊脂培養基時，一定要根據要求選擇合適的血瓊脂基礎，現把我公司的相關產品信息列舉如下，方便實驗人員按需選用。

表1 針對不同標準的血瓊脂培養基基礎產品（注：點擊產品名稱或產品編號即可查看產品詳情）

五、平板製備

  培養基基礎選定之後，根據需要加入不同形式的血液，即可製成血瓊脂平板使用。若製作過程中有混合不均勻、有氣泡或平板變黑等現象，可參考哥倫比亞血瓊脂基礎培養基的原理和使用方法所述方法盡量避免。本文就最關鍵的幾點，再強調一下。

（1）由於血液不耐高溫的特性，在血瓊脂平板製作過程中，尤其要注意將培養基基礎冷卻至50℃左右，並且血液要平衡至30℃～40℃，再緩慢加入混合均勻。如果將血液直接從冰箱裏拿出來馬上加入培養基，由於溫差較大，加入後很容易形成片狀凝固。

（2）向培養基中添加血液時，緩慢放液，同時緩慢搖動三角瓶使相互混勻。放液太快容易形成片狀凝固。搖動太劇烈會形成氣泡，培養基粘度大氣泡形成後很難消除。

（3）傾注培養基後，盡量放在水平地方冷卻。如果擺放培養皿的台子不是平麵，液體保持水平，而皿是斜的，最後造成培養基在某一直徑上形成一邊高一邊低的現象。

（4）一定要留出充足的凝固時間，等培養基完全凝固後再收集平板。有時候看似凝固了，隻是表麵凝固，倒過來或移動後以會造成培養基平板坍塌或坑窪不平。

注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創，未經允許不得轉載。

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