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雙歧杆菌瓊脂培養基檢驗原理和使用方法

張輝
錄入時間:2024-10-8 16:40:42 來源:青島betway必威西汉姆联生物

一、雙歧杆菌屬情況簡要介紹:

  雙歧杆菌(Bifidobacterium)是1899年由法國學者Tissier從母乳營養兒的糞便中分離出的一種厭氧的革蘭氏陽性杆菌。雙歧杆菌是有益菌的代表,其中的嬰兒雙歧杆菌(B.infantis)、青春雙歧杆菌(B.adolescentis)、長雙歧杆菌(B.longum)和短雙歧杆菌(B.breve)等已廣泛用於藥品或含活菌醫療保健品——微生態調節劑的生產上。

  雙歧杆菌屬於放線菌科,不抗酸、無芽孢,無動力,菌體形態多樣,呈短杆狀、纖細杆狀或球形,可形成各種分支或分叉形態。發酵碳水化合物活躍,發酵產物主要是乙酸和乳酸,二者的摩爾比是3:2,不產生二氧化碳,不產生丁酸和丙酸,觸酶陰性。

雙歧杆菌的鑒定通常是用雙歧杆菌瓊脂厭氧培養基進行分離計數,最後進行塗片鏡檢、生化鑒定及有機酸代謝產物測定。


二、產品用途及原理:

  該培養基用於雙歧杆菌的分離培養。

  蛋白腖和酵母浸粉提供微生物生長所需的碳源、氮源、維生素和生長因子;可溶性澱粉可提供碳源;葡萄糖為可發酵糖類;吐溫80、肝浸粉、番茄浸粉和L-半胱氨酸為培養各種雙歧杆菌提供生長因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑。


三、培養基配方(g/L):

蛋白腖

15.0

葡萄糖

20.0

酵母浸粉

2.0

可溶性澱粉

0.5

氯化鈉

5.0

L-半胱氨酸

0.5

番茄浸粉

5.0

肝浸粉

0.3

瓊脂

20.0

pH值6.8±0.2(25℃)


四、試驗方法:

  1. 稱取本品70.0g,再吸取1mL吐溫80,加熱溶解於1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15min-20min,稍冷後傾入無菌平皿,待凝固後備用。

  2. 10倍梯度稀釋法製備質控菌株菌懸液,吸取適宜梯度的菌懸液塗布接種於待測培養基和參比培養基;

  3. 放置於恒溫培養箱36℃±1℃厭氧培養48h,觀察試驗結果。


五、試驗結果判斷:

  接種以下質控菌株,放置36℃±1℃厭氧培養48h,試驗結果如圖1所示。

質控菌株

菌株編號

接種量(CFU)

參比或計數培養基

方法

生長情況

其他特征

長雙歧杆菌

CICC 6068

10-100

MRS

定量

PR≥0.7

圓形凸起,奶油色,邊緣整齊

嬰兒雙歧杆菌

CICC 6069

10-100

MRS

定量

PR≥0.7

圓形凸起,奶油色,邊緣整齊

圖1 雙歧杆菌瓊脂培養基微生物質控結果


六、注意事項

  嬰兒雙歧杆菌為厭氧菌,氧氣對其有毒害作用,應在厭氧操作箱中操作,若是在正常環境中操作,從厭氧菌暴露在空氣中開始到放入厭氧環境中培養結束,整個過程應盡可能快速操作,一般不超過15分鍾,暴露時間越長,厭氧菌越容易死亡。

  厭氧菌培養相關信息可參考原創文章:專性厭氧菌的培養方法及注意事項-點擊查看


相關產品:

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注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。

 

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