一、實驗目的
了解真菌接種、培養的一般程序；掌握單細胞真菌和多細胞真菌的菌絲、孢子的形態特點；掌握真菌不染色標本直接檢查方法。
二、實驗內容
（一）真菌的菌落觀察
觀察真菌菌落的形態特點及顏色有助於病原性真菌的鑒定。一般觀察真菌的菌落必需將真菌培養於沙保弱氏培養基（俗稱大培養），經數日致十數日的培養後才可看到典型菌落。
1. 材料
（1）臨床標本（可疑真菌感染）：毛發或皮屑。
（2）真菌菌種：新生隱球菌，白假絲酵母菌，絮狀表皮癬菌。
（3）沙保弱氏葡萄糖斜麵培養基（含青、鏈黴素）。
（4）其它：70%酒精 、無菌生理鹽水 、平皿等。
2. 方法
（1）臨床標本用70%酒精浸泡數分鍾，殺死表麵雜菌，以無菌生理鹽水洗滌。
（2）將處理過的臨床標本和實驗室保存菌種分別接種於2~3隻含有青、鏈黴素的沙保弱氏葡萄糖斜麵培養基上，對臨床標本直接將數根毛發或數塊皮屑接種。真菌菌種則用滅菌接種環按斜麵培養基接種法接種。
（3）置22~28℃培養2~3w或37℃培養箱中培養3~7d。
（4）一周觀察1~2次，臨床標本連續培養3w無菌落生長者可報告陰性，如長出菌落，應逐日觀察菌落形態及顏色變化。
3. 結果觀察
真菌的菌落從形態上可分三大類：酵母菌落、酵母樣（型）菌落及絲狀菌落。
（1）酵母菌落（觀察新生隱球菌培養物）：菌落為圓形、較白色，邊緣整齊表麵光滑、濕潤，假菌絲不伸入到培養基內，和表皮葡萄球菌菌落相似。
（2）酵母樣（型）菌落（觀察白假絲酵母菌）：表麵和酵母菌落相似，但生成的假菌絲伸入培養基內。
（3）絲狀菌落：觀察各種皮膚絲狀菌斜麵培養物,菌落表麵大都有氣生菌絲,肉眼觀察呈絨毛狀、粉狀、棉花樣等，故稱絲狀菌落，色澤多種多樣，紅色毛菌呈紫紅色，鐵鏽色毛菌呈鐵鏽色或棕色等，菌落底層有營養菌絲伸入培養基內。
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