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硫化氫陽性的大腸杆菌的鑒定報告



錄入時間:2010-12-17 10:21:47 來源:中國論文下載中心

 

大腸杆菌是人和動物腸道的正常菌群,並廣泛分布於自然界中,除部分具有致病性外,大多數屬於正常菌群,近2年我們在腹瀉患者糞便中分離出引起致瀉的H2S陽性的大腸杆菌,就此我們進行了係統鑒定,現將鑒定結果介紹如下。以供參考。

    1  材料與方法

    1.1  材料來源  所采檢樣來源於新疆烏魯木齊市第一人民醫院兒童分院腹瀉病門診,按常規法采樣送檢。

    1.2  實驗用培養基和診斷血清  S.S瓊脂、伊紅美蘭瓊脂均由上海醫學化驗所提供。水解酪蛋白瓊脂、生化試驗培養基均由浙江省軍區後勤部衛生防疫檢驗所提供。

    雙糖鐵培養基由衛生部上海生物製品研究所提供。試驗前按2%的尿素、1%的蔗糖量分別加入雙糖鐵半固體培養基內,製成三糖鐵尿素半固體培養基斜麵備用。

    藥物敏感試驗紙片由北京天壇藥物生物技術開發公司提供。

    沙門菌屬診斷血清、致病性大腸艾希菌診斷血清均由衛生部成都生物製品研究所提供。

    實驗用對照菌株選用地方株200020(O111K58)大腸杆菌;藥物敏感試驗菌株選用ATCC 25922

    1.3  方法  待檢樣品的分離檢驗程序均按常規法進行,將患者糞便標本直接劃種於伊紅美蘭瓊脂和S.S瓊脂平板上,置37溫箱培養24h後觀察。

    2  結果與分析

    2.1  形態學分析  按上述方法進行分離劃種,置37溫箱培養24h後在伊紅美蘭瓊脂平板上生長出邊緣整齊、濕潤、紅色的菌落。S.S瓊脂平板上生長出紅色且中心產H2S的菌落,該菌在兩皿上均呈現為優勢菌落。將上述特征的菌落挑取若幹個穿刺接種於三糖鐵尿素半固體培養基斜麵上,置37溫箱培養1824h後,反應為典型的大腸艾希菌的初步生化反應:發酵葡萄糖產酸產氣、分解乳糖、尿素酶陰性、動力陽性。所不同的是產生硫化氫,對該典型菌落進行了塗片染色後,鏡下觀察為革蘭陰性無芽孢小杆菌。

2.2  血清學試驗  采用沙門菌屬診斷血清和致病性大腸艾希菌診斷血清對待檢菌株進行了玻片凝聚試驗,兩屬血清均未發現凝聚現象。

    2.3  生化試驗  在初步生化試驗的基礎上對該菌進行了大生化試驗,其結果也符合大腸艾希菌的生化反應(見表1)。表待檢菌的生化反應

    2.4  藥敏試驗  我們對待檢菌進行了藥敏試驗,結果對慶大黴素、痢特靈、複方新諾明,氟呱酸敏感,對青黴素、紅黴素、強力黴素均有不同程度的耐藥。

    2.5  毒力試驗(小白鼠腹腔注射法將待檢菌株轉種於肉湯培養基中置37培養24h後,取0.5ml肉湯培養物加入另一支4.5ml的肉湯培養管中置37培養2h後,按不同量稀釋(2h培養物、10倍倍比稀釋2個濃度)後注射於小白鼠腹腔內,以每2隻為一試驗平行組,共注射三組,每隻按0.5ml量注射,同時設有2隻作為陰性對照組,注射3h後各試驗組小白鼠均開始出現不同程度的發病症狀,腹瀉,四肢無力,精神萎糜,尤其是高濃度注射組發病明顯,注射5h後即死亡,其他各組也於24h內相繼死亡。證明該菌具有致病力。

    3  討論

    血清學試驗是細菌學鑒定工作中常用的方法之一,此次試驗中我們采用沙門菌屬診斷血清和致病性大腸艾希菌診斷血清對待檢菌進行了血清學試驗,兩屬血清均未發現凝聚現象,如僅從血清學試驗上分析並不能支持我們的判定,但在進一步的毒力試驗中證明該菌確定可導致發病,無疑是引起腹瀉的病原菌。除H2S陽性與大腸杆菌不符外,其他生化試驗結果均具有大腸杆菌的生化特性。綜合以上試驗,無論從形態學和常規的生化反應以及毒力試驗結果分析,都與大腸杆菌相符,因此我們認為該菌是大腸杆菌。

近年來也有過H2S遲緩陽性的大腸杆菌[1]的報道,但在我區還是首次發現,該菌株與相應的診斷血清均不發生凝聚,但在生化反應上又極具備大腸艾希菌的特性,是否與菌株本身產生H2S有直接影響,筆者認為有必要對此特性進行研究,對H2S所能產生的毒力及對表型特征的幹擾等應做一分析,對菌株是否自身發生變異以及其他特性所致,也有待於進一步探討。

作者:高濤 高濤 阿衣夏木 於烽 遠雪梅 《中華醫學研究雜誌》

【參考文獻】
  1
陳霞, 牟懷德, 左金蓉,. 中國衛生檢驗,2000,10(1): 74.

 

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