酸奶中嗜熱鏈球菌的分離及鑒定（1）

1.  材料與方法

1.1分離培養基

BCG牛乳培養基 ：

 ( A) 溶液： 脫脂乳粉2 0 g，水1000mI，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.2mL 80℃滅菌 20min

( B ) 溶液： 酵母膏 2g，水100mI，瓊脂 4g，121℃濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將( A) ( B ) 溶液混合均勻後倒 8個平板。

乳酸菌葡萄糖發酵培養基 蛋白腖0.5g，牛肉膏0.5g，酵母膏0.5g， 吐溫 8 0 0.05ml，葡萄糖1g， 蒸餾水100ml， 加入1.6%溴甲酚紫溶液約0.14ml。以上成分溶解後調pH到 6.8 ～7.0分裝到10隻試管中。每隻試管裏再放置一支德拉姆氏小管。105℃濕熱滅菌 15min。

 牛乳培養基 12g全脂奶粉，加水100mL加入10g 葡萄糖，溶解後分裝，105℃滅菌15min， 取出備用。 

1.2實驗方法

嗜熱鏈球菌分離與純化  將新鮮酸奶采用稀釋平板塗布法進行平板塗布分離。挑取培養基上的黃色菌落( 菌落周圍培養基變為黃色)，采用劃線法進行分離純化，獲得純菌種。

菌種的革蘭氏染色和形態觀察  將分離的純菌種接種在BCG牛乳培養基上，40℃培養28h，用無菌接種環取一環菌均勻塗布在滴有無菌水的載玻片上，自然風幹。固定後進行革蘭氏染色。染色後用顯微鏡油鏡進行觀察。

發酵產物鑒定——紙層析法  將分離的純菌種接種到乳酸菌葡萄糖發酵培養基上， 40℃培養48h。取產酸不產氣的液體試管中發酵液做紙層析。展開劑：水30mL、 苯甲醇150mL、 正丁醇150mL、甲酸3.3mL。 顯色劑 ： 將1.6%的溴酚藍酒精溶液用0.1 mol／L的 NaOH 調pH到6.7。顯色後，分別測定發酵液與2%標準乳酸的Rf值，確定發酵產物中是否有乳酸。

牛奶發酵實驗 將分離的純菌種活化後，以2%的接種量接入牛乳培養基中，搖勻後，將瓶蓋擰緊密封。將三角瓶置於40℃恒溫箱中培養，出現凝固後轉入4℃冰箱中冷藏24h。

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