植物製片是進行園藝植物科學研究所需用的一種基本方法,比如進行植物各個器官的解剖構造觀察、花芽分化研究、授粉受精觀察、貯藏營養觀測以及染色體觀察等等都需要進行製片。 。通過對切片結果的分析,可以比較不同試驗處理的效果以及了解不同樹種和品種相應的生物特性等。植物製片技術是一個相對獨立的體係,內容繁多。本章中我們僅介紹在園藝植物科學研究中常用的一些基本方法和原理。
第一節 徒手製片
一、徒手製片及特點
徒手製片(切片)一般指徒手用刀片(常用單麵刀片)把新鮮的植物材料切成薄片的製片方法。此法在植物製片中具有十分重要的地位,是一種普遍應用的製片方法。
徒手製片的主要優點是:
(1)能及時觀察研究植物生活組織的結構和天然色彩;
(2)方法及用具簡單,不需切片機等機械設備,短時間即可完成,這是其他方法所不及的;
主要缺點是
(3)對於微小、柔軟、水分過多以及堅硬的材料,難以用徒手切成薄片;
(4)對於操作不熟練者,往往切成厚薄不勻或不完整的切片。
二、徒手製片的方法及注意事項
徒手製片最主要的工具就是刀片,常可用單麵保安刀片。要獲得良好的切片,首先要保持刀口的鋒利,切片前,先準備好一個培養皿盛好清水,同時準備好顯微鏡、載玻片、蓋玻片、刀片等用具,然後拿取材料進行切片。材料可以是新鮮的材料,也可以是經過固定的材料。
切片時,將欲切材料斷麵和刀片上滴上清水以保持材料濕潤。以左手拇指、食指、中指捏住材料,拇指應低於食指,以免切傷手指;材料高出指尖。右手執刀,將刀平放在食指上,刀口朝內,刀麵與材料斷麵平行,然後以均勻快捷的動作自左前方向右後方以臂力帶動刀片水平切割移動,不要用腕力。切片時還要注意,切時動作要迅速,材料一次切下,切忌停頓或拉鋸式切割。連續切數片後,將切下的薄片輕輕移入盛水的培養皿中備用。然後挑選薄而透明的切片,放在載玻片上的水滴中,加上蓋玻片製成臨時製片進行觀察。
用徒手切片的材料不宜過大,一般以表麵不超過5-8mm²為宜。對於過於柔軟或微小的材料(如葉片、細小的根尖等)需要借助一些夾持物方可進行切片,如果臨時製片需保存一段時間,(1)將材料封在水中,每隔20-30分鍾再加一滴水,此法可保持數小時;(2)用10%-30%的甘油水溶液代替清水封片,並將製片放在鋪有濕濾紙的大培養皿中保存,或用石蠟或指甲油封邊保存,可保存1-2周或更長時間。
第二節 壓片及塗片
塗片和壓片是進行植物染色體觀察研究常用的製片方法。其中塗片是將新鮮的材料或者是經過固定的材料於載片上,托塗成均勻一層,經染色後蓋上蓋玻片鏡檢。壓片是將處理後的材料於載片上分散後加蓋片,用拇指或鑷子輕輕擠壓蓋片,使組織分散成一片,然後鏡檢。
用此法進行染色體觀察時注意,若進行染色體數目測定要求取樣個體數在5個以上,細胞總數在30個以上;若進行染色體核型分析(組型分析)則要求取樣應是來源於不同個體的5個細胞。
一、常規壓片法
1.取材:與細胞分裂旺盛時期取樣,一般植物在上午9-12時,下午2-5時,一般取根尖、莖尖。
2.預處理(前處理):目的是防止紡錘體的形成,使細胞分裂停止在中期階段,從而獲得較多的中期分裂相,同時預處理還可以使染色體收縮變短,便於觀察統計。常用的預處理藥劑有:0.05%-0.2%的秋水仙堿溶液、8-羥基喹啉0.002-0.004M、對二氯苯飽和水溶液、富民隆0.01-0.001%。預處理的時間一般為2-12小時。
3. 固定:目的是把細胞迅速殺死,是蛋白質變性沉澱,盡量保持材料結構的原有狀態。常用的固定液為卡諾固定液,即3:1的純酒精:冰醋酸溶液。固定時間一般為1-24小時。
4.解離:用鹽酸處理固定後的材料,使細胞分離,便於壓片。一般可用1N的HCl於60攝氏度下15-20分鍾或5N的HCl室溫下20-25分鍾。
5.染色:用卡寶-品紅或醋酸洋紅等核染色劑進行染色。
6.壓片:將材料移至載玻片上,蓋上蓋玻片,然後輕輕擠壓蓋片,使材料成一薄層。
7.鏡檢:將製好的片子於顯微鏡下進行染色體觀察。
8.封片:臨時封片可用石蠟封邊即可。好的片子可進行冷凍幹燥,然後用光學樹膠封固保存。
第三節 石蠟製片
石蠟製片法是將材料經過固定、脫水、透明、浸蠟後包埋在石蠟裏麵進行切片的方法,是永久製片法。是光學顯微鏡的製片技術中最常用的一種方法。
下一篇:組織培養母液製備
相關文章: | |
常見園藝植物組織培養培養基配方 |