4、大腸埃希氏菌
4.1多管發酵法4.1.1範圍本標準規定了用多管發酵法測定生活飲用水及其水源水中的大腸埃希氏菌。本法適用於生活飲用水及其水源水中大腸埃希氏菌的測定。4.1.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準4.1.2.1大腸埃希氏菌多管發酵法multiple tube fermentation technique for Escherichia coli大腸埃希氏菌多管發酵法是指多管發酵法總大腸菌群陽性，在含有熒光底物的培養基上44.5℃ 培養24h產生β-葡萄糖醛酸酶，分解熒光底物釋放出熒光產物，使培養基在紫外光下產生特征性熒光的細菌，以此來檢測水中大腸埃希氏菌的方法4.1.3培養基與試劑4.1.3.1 EC - MUG培養基4.1.3.1.1成分 A 胰蛋白陳 20.0g B 乳糖 5.0g C 3號膽鹽或混合膽鹽 1.5g D 磷酸氫二鉀 4.0g E 磷酸二氫鉀 1.5g F 氯化鈉 5.0g G 4-甲基傘形酮書-β-D-葡萄糖醛酸昔（MUG）0.05g4.1.3.1.2製法 將幹燥成分加人水中，充分混勻，加熱溶解，在366nm紫外光下檢查無自發熒光後分裝於試管中，68.95 kPa (115℃，10lb）高壓滅菌20min，最終pH為6.9士0.2
4.1.4儀器4.1.4.1紫外光燈：6W、波長366nm的紫外燈，用於觀測熒光反應4.1.4.2培養箱：36℃ 士1℃ 。4.1.4.3天平。4.1.4.4平皿：直徑為9cm4.1.4.5試管4.1.4.6分度吸管：1 ml , 10 mL4.1.4.7錐形瓶。4.1.4.8小倒管4.1.4.9金屬接種環4.1.4.10冰箱：O℃ 一4℃ 。4.1.5檢驗步驟4.1.5.1接種 將總大腸菌群多管發酵法初發酵產酸或產氣的管進行大腸埃希氏菌檢測。用燒灼滅菌的金屬接種環或無菌棉簽將上述試管中液體接種到EC-MUG管中。4.1.5.2培養 將已接種的EC-MUG管在培養箱或恒溫水浴中44.5℃ 士0.5℃ 培養24h士2h。如使用恒溫水浴，在接種後30min內進行培養，使水浴的液麵超過EC-MUG管的液麵。4.1.6結果觀察與報告 將培養後的EC一MUG管在暗處用波長為366nm功率為6W的紫外光燈照射，如果有藍色熒光產生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。計算EC-MUG陽性管數，查對應的最可能數（MPN）表得出大腸埃希氏菌的最可能數，結果以MPN/100 ml報告。4.2濾膜法4.2.1範圍本標準規定了用濾膜法測定生活飲用水及其水源水中的大腸埃希氏菌本法適用於生活飲用水及其水源水中大腸埃希氏菌的測定4.2.2術語和定義下列術語和定義適用於本標準。4.2.2.1大腸埃希氏菌誰膜法membrane rilter technique for Escherichia coli用濾膜法檢測水樣後，將總大腸菌群陽性的濾膜在含有熒光底物的培養基上培養，能產生-β-葡萄糖醛酸酶分解熒光底物釋放出熒光產物，使菌落能夠在紫外光下產生特征性熒光，以此來檢測水中大腸埃希氏菌的方法。4.2.3培養基與試劑4.2.3.1 MUG營養瓊脂培養基（NA—MUG )
4.2.3.1.1成分
A 蛋白陳 5.0g
B 牛肉浸膏 3.0g
C 瓊脂 15.0g
D 4-甲基傘形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（MUG）0.1g
E 蒸餾水 1000 ml
4.2.3.1.2製法 將幹燥成分加入水中，充分混勻，加熱溶解．103.43kPa ( 121℃，15lb）高壓滅菌15min，最終pH為6.8士0.2在無菌操作條件F傾倒直徑50mm平板備用。傾倒好的平板在4℃條件下可保存兩個星期 本培養基也可不加瓊脂，製成液體培養基，使用時加2mL——3ml於滅菌吸收墊上，再將濾膜置於培養墊上培養4.2.4儀器4.2.4.1紫外光燈：6W、波長366 nm的紫外燈，用於觀測熒光反應4.2.4.2其他儀器同2.2.44.2.5檢驗步驟4.2.5.1接種 將總大腸菌群濾膜法有典型菌落生長的濾膜進行大腸埃希氏菌檢測。在無菌操作條件下將濾膜轉移到NA-MuG平板上，細菌截留麵朝上，進行培養4.2.5.2培養將已接種的NA-MUG平板36℃士1℃培養4h。4.2.6結果觀察與報告 將培養後的NA-MUG平板在暗處用波長為366nm功率為6W的紫外光燈照射，如果菌落邊緣或菌落背麵有藍色熒光產生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。記錄有藍色熒光產生的菌落數並報告，報告格式同總大腸菌群濾膜法格式
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