原理：某些細菌在糖代謝過程中生成丙酮酸，有的甚至進一步被分解為甲酸、乙酸、乳酸等，而不是生成V－P試驗中的二乙酰，從而使培養基的pH下降至4.5或以下（V－P試驗的培養物pH常在4.5以上），故加入甲基紅試劑呈紅色。本試驗常與V－P試驗一起使用，因為前者呈陽性的細菌，後者通常為陰性。
培養基：同V－P試驗培養基。
甲基紅指示劑：0.1g甲基紅溶於300ml95％酒精中，再加入蒸餾水200ml。
方法：接種細菌於培養液中， 37℃培養2～7天後，於培養物中加入幾滴試劑，變紅色者為陽性反應。
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