⑴將24h的肉湯培養物(如大腸杆茵的)稀釋至3x l08mL(可以使用顯微鏡計數 法,或經顯微鏡計數校準的比濁劑或濁度管）。
(2)取10mL上述稀釋液加入至90mL無菌稀釋液中（如0.1%蛋白腖溶液）,加入數 粒玻璃珠，充分振蕩混合打碎菌落D各取5mL分裝到5個無菌的測試管 中(用聚丙乙醇密封試管效果更好、
(3)將操作步驟2製備的試管放入58℃水浴中，同時放入一個裝有5mL稀釋液和溫 度計的測試管，當溫度測試管中的溫度值比水浴溫度低It：時取出1支試管，間時開始 計時。 ’
(4)很快將取出的試管轉移到冷水中，準備6個稀釋度,並用所有的稀釋度進行平板 計數。
(5)分別於Z.SmLnJ.SmiiulOmin取出1支試管，重複第4步操作
(6)將平板放人培養箱培養，檢測不同加熱時間段存活的菌體數,做loglt((存活的菌 數)/時間圖，從圖中找出最佳直線斜率的倒數作為值(以min計)。
(7)按下列水浴溫度和分段計數時間，重複(1)〜（6)的操作步驟D
56℃ 0,10min,20niLn,30min,40min 和 50min
54℃ 0,10min,20min,30mLn,40min 和 50min
52℃ 0,20min,35min,50min,65rnin 和 80min
51℃ 0 ’ 20min，40min，60min，8Omin 和 1OOmin
50℃ 0,20min,40min,60min,80min 和 lOOmin
(8)以log10DT和T為坐標做圖，並估計z值。
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