黑穗醋栗組織培養和遺傳轉化三
錄入時間:2009-7-1 15:10:09
來源：青島betway必威西汉姆联
3 討論轉基因植株的獲得依賴於合適的轉化受體及轉化細胞的有效再生。合適的轉化受體首先要容易再生，要有高效穩定的再生能力。木本果樹的再生能力往往不如草本植物，這是造成木本果樹轉化難度較大的主要因素之一。因此，在進行轉化之前選擇易於再生的外植體，建立有效的再生體係是十分必要的。多種外植體已經用於果樹遺傳轉化的研究陣, 木本果樹常用的轉化受體為未成熟胚、子葉、體細胞胚、幼莖、愈傷組織、胚性懸浮細胞和莖尖分生組織等。在以細胞作為轉基因受體時，由於細胞再生植株常受基因型限製，往往不能得到再生植株，從而使獲得的轉基因材料無法遺傳下去。為解決這一問題，近年來有研究者提出了種質轉化和非品種依賴型轉基因技術體係的構建，即尋找將基因轉人植物的種質係統中去的方法。通常采用的方法是莖尖轉化（包括基因槍、農杆菌介導）、基因槍轟擊花粉和種子法、種子浸泡法和子房注射法等。
目前，應用於果樹遺傳轉化的方法主要有農杆菌介導法和DNA 直接導入法。本研究以黑穗醋栗莖尖分生組織為轉化受體，利用農杆菌介導法進行基因轉化的研究，獲得了PCR 陽性株。莖尖再生體係是較為理想的基因轉化受體係統。該係統存在的問題是，莖尖對卡那黴素的耐受性較強，故“逃逸”芽及嵌合體出現較多，因此，轉化芽需經較長時間的繼代篩選。本試驗確定的莖尖分化卡那黴素篩選濃度為25 mg/L，該濃度已完全抑製了莖尖的分化。另外，本實驗在莖尖分化、繼代、生根等過程中都將進行卡那黴素篩選，盡量減少“逃逸”芽及嵌合體的出現。
4 結論
黑穗醋栗莖尖最佳分化和繼代培養基為MS 十6-BA1.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L, 30 g/L蔗糖，0.8 % 瓊脂，pH 5.8 。最佳叢生芽生根培養基為1 / 2MS , 30 g/L蔗糖，0.8 ％瓊脂，pH5.8 。確定莖尖分化階段卡那黴素的最適質量濃度為25 mg/L。叢生芽生根階段卡那黴素最適質量濃度為20 mg/L。獲得了抗卡那黴素的再生植株。提取轉基因植株基因組DNA , 進行PCR 檢測，結果表明osMAPK4 基因已經被整合到黑穗醋栗基因組中。
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