HAV雖可在培養細胞中增殖，但由於不引起明顯的細胞病變，難判定病毒是否增殖，故實驗室診斷一般不依靠分離病毒，而是以血清學檢查為主。
血清學檢查 檢測抗HAV常用RIA和ELISA法。檢測抗HAV IgM可做為HAV早期感染的指標，有助於早期診斷；檢測抗HAV IgG有助於流行病學調查；檢查糞便中抗HAV IgA也有助於診斷。
病毒及其抗原檢測 在潛伏末期和急性期早期，可以采取咽拭子或糞便上清液接種於敏感細胞進行分離培養和鑒定，也可采用免疫電鏡檢測糞便中的HAV顆粒進行診斷；用放射免疫(RIA)或酶聯免疫(EIA)法檢測培養細胞或糞便中HAV的抗原。病毒核酸檢測 應用cDNA-RNA核酸雜交技術及RT-PCR技術檢測標本中HAV的RNA，方法特異、敏感。
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