試劑
(1)0.05mol/L磷酸鹽緩衝液pH6.5+500mg/L半胱氨酸-HCl。
(2)6mg/mLNaF+10mg/mL碘乙酸鈉或鉀
(3)果糖-6-磷酸鹽(鈉鹽,70%-98%純度)80mg/mL水溶液。
(4)鹽酸羥胺(Hydroxy Lamine-HCl) 139mg/mL水溶液,使用時以NaOH中和至pH6.5。
(5)15g/100mL 三氯乙酸(TCA) 水溶液。
(6)4mol/L HCl。
(7)0.5 g/100mL FeCl3·6H2O溶於0.1mol/L HCl中。
1、挑取BBL瓊脂上純培養的雙歧杆菌接種到TPY液體培養基, 絕對厭氧,36±1℃ 培養72h±3h。從10mL TPY培養液於3000r/min離心5min,棄上清液,細胞用上述試劑(1)洗滌2次,然後懸浮於1.0mL試劑(1)中。將盛有細胞懸液的容器置於一冰浴內,用超聲波處理20min,以破碎細胞。然後在超聲波處理物中加入試劑(2)和試劑(3)各0.25mL,置於37℃保溫30 min。保溫後在溶液中入1.5mL試劑(4),置室溫5 min。加入試劑(5)和試劑(6)各1mL,置室溫5 min。然後加入1mL試劑(7)觀察溶液顏色。
2、結果判定:經以上程序測定如顯紅褐色或紅紫色,則果糖-6-磷酸鹽磷酸酮酶為陽性,否則為陰性。
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