一、試驗原理：
丁酸梭菌又叫酪酸梭菌，是一種嚴格厭氧的革蘭氏陽性芽孢杆菌，菌體呈杆狀或稍有彎曲，周身鞭毛，能運動。酪酸梭菌是人的正常腸道菌群之一，有氧條件不生長，革蘭氏染色為陽性，能夠發酵乳糖、麥芽糖、棉籽糖、甘露醇等碳水化合物產酸，不發酵山梨醇，硝酸鹽還原試驗為陰性。
二、試驗步驟及結果
1、將1小包丁酸梭菌活菌散溶解於含9mL無菌生理鹽水的試管內，取1mL菌液加入至厭氧皰肉培養基內，置於35℃恒溫箱內培養。
圖1皰肉培養基
培養24h後，皰肉培養基渾濁，並產生大量氣泡。
2.用接種環挑取皰肉培養基菌液劃線接種於TSA平板，放入厭氧袋內，並放入厭氧產氣包，置於35℃恒溫箱內進行厭氧培養，另劃線接種TSA平板，置於有氧條件下35℃恒溫箱進行培養。
圖2 TSA平板上的菌落形態
培養24h後，有氧條件培養下的TSA平板上無任何菌落生長，厭氧條件培養下的TSA平板細菌生長良好，菌落為白色且形狀不規則，沿接種線向周圍擴散生長，表明該菌生長條件為嚴格厭氧，且具有較強動力。
3.從純培養後的TSA平板上挑取菌落進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察菌體形態。
圖3 油鏡下的菌落革蘭氏染色
該菌的革蘭氏染色為陽性，顯微鏡下菌體為紫色杆狀，兩端鈍圓，部分菌體稍有彎曲。
4.挑取TSA上純培養的單菌落至9mL無菌生理鹽水試管內，分別接種於乳糖、麥芽糖、棉籽糖、甘露醇、山梨醇和硝酸鹽還原生化管，置於35℃恒溫培養箱內厭氧培養。
圖4 生化反應鑒定
培養24h後，該菌生化反應結果為乳糖陽性（變黃）、麥芽糖陽性（變黃）、棉籽糖陽性（變黃）、甘露醇陽性（變黃）、山梨醇陰性（顏色不變）、硝酸鹽還原陰性（加試劑不變色，加鋅粒後變紅），該結果符合丁酸梭菌的典型生化反應特征。
三、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
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