熒光物質在紫外線照射下，能夠發出可見的熒光。某些熒光物質在一定條件下，能與抗體發生結合，形成熒光標記抗體，熒光標記抗體再與抗原結合後，在熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體複合物呈現熒光而明顯可見，稱為熒光抗體技術。
目前常用的熒光物質有異硫氰酸熒光素（發綠色熒光）和羅丹明（發橙黃色熒光）。
熒光抗體染色方法主要有直接法和間接法兩種。
（1）直接法
將待測抗原製成顯微鏡標本，在其上滴加已知熒光標記抗體。一定時間後，用緩衝液衝洗，再放在熒光顯微鏡下觀察，若有相應的抗原存在，則會發出熒光。
此法可用於鑒定組織、細胞中的蛋白質和微生物，方法較簡便。缺點是每檢查一種抗原，必須製備與其相應的熒光標記抗體。
（2）間接法
先用未標記的特異性抗體處理塗片標本。如有相應抗原存在，則會與抗體形成複合物。然後再滴加熒光標記的抗免疫球蛋 白抗體（或稱抗抗體），則熒光標記抗抗體與複合物中的抗體結合，從而顯出熒光，為陽性反應。由於熒光物質不是直接標記抗體， 而是標記抗免疫球蛋 白的抗體，所以稱為間接法。
間接法用一種熒光標記抗抗體，可以研究某種動物的各種免疫血清，靈敏度也比直接法高。
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