醬油—菌落總數的測定—平板計數法

1  範圍

本方法采用平板計數法測定餐桌醬油中菌落總數的含量。

本方法適用於餐桌醬油中菌落總數的測定，以cfu/mL 報告其結果，測定值保留兩位有效

數。

2  原理

樣品經過處理，在一定條件下培養後（如培基成分、培養溫度和時間、PH、需氧性質等） ，

所得1 mL 檢樣中所含菌落的總數。本方法規定的培養條件下所得的結果，隻包括一群在營養瓊脂上生長發育的嗜中溫性需氧的菌落總數。

3  試劑

3.1  氫氧化鈉溶液，150g/L

3.2  生理鹽水

3.3  乙醇溶液，750g/L

3.4  營養瓊脂培養基：將10g蛋白腖、3g 牛肉膏、5g 氯化鈉溶解於 1000mL 蒸餾水中，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正PH至7.2～7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。

4   儀器

4.1   溫箱：36±1℃

4.2   恒溫水浴：46±1℃

5   操作步驟

5.1  樣品處理：用點燃的酒精棉球燒灼瓶口滅菌，用石碳酸紗布蓋好，再用滅菌開瓶器啟開後進行檢驗。

5.2  檢樣稀釋及培養

5.2.1   以無菌操作，吸取醬油樣品25 mL，加入裝有225mL滅菌蒸餾水的滅菌玻璃瓶內經充分振搖做成1:10 的均勻稀釋液。

5.2.2   用 lmL 滅菌吸管吸取 1:10 稀釋液 lmL，沿管壁徐徐注入含有 9mL 滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成 1:100 的稀釋液。

5.2.3  另取 lmL滅菌吸管，按 5.2.2操作順序，做10 倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，

即換用1 支lmL滅菌吸管。

5.2.4   根據食品衛生標準要求或對標本汙染情況的估計，選擇2 一 3 個適宜稀釋度，分別在做10 倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移 lmL 稀釋液於滅菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。

5.2.5   稀釋液移入平皿後，應及時將涼至 46℃營養瓊脂培養基(可放置於 46±1℃水浴保溫)注入平皿約 l5mL，並轉動平皿使混合均勻。同時將營養瓊脂培養基傾入加有lmL稀釋液的滅菌平皿內作空白對照。

5.2.6  待瓊脂凝固後，翻轉平板，置36士 l℃溫箱內培養 48 士 2h。

5.3   菌落計數方法

    做平板菌落計數時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的

菌落數後，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數。

5.4   菌落計數的報告

5.4.1 平板菌落數的選擇

    選取菌落數在30 一 300 之間的平板作為菌落總數測定標準。一個稀釋度使用兩個平板，應采用兩個平板平均數，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數，若片狀菌落不到平板的一半，而其餘一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板後乘2以代表全皿菌落數。平皿內如有鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個菌落;如果有不同來源的幾條鏈，則應將每條鏈作為一個菌落計。

5.4.2  稀釋度的選擇

5.4.2.1  應選擇平均菌落數在30 一 300 之間的稀釋度，乘以稀釋倍數報告之。

5.4.2.2  若有兩個稀釋度，其生長的菌落數均在30 一 300 之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小於或等於2，應報告其平均數;若大於 2 則報告其中較小的數字。

5.4.2.3 若所有稀釋度的平均菌落數均大於300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。

5.4.2.4 若所有稀釋度的平均菌落數均小於30， 則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。                                                                          

5.4.2.5 若所有稀釋度均無菌落生長，則以小於1 乘以最低稀釋倍數報告之。

5.4.2.6 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30一300之間， 其中一部分大於300或小於30時，則以最接近30 或300 的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。

5.4.3  菌落數的報告

    菌落數在100 以內時，按其實有數報告，大於100 時，采用二位有效數字，在二位有效數字後麵的數值，以四舍五入方法計算。為了縮短數字後麵的零數， 也可用10的指數來表示。