新型淋球菌培養基分離培養淋球菌的研究

淋球菌是主要的性傳播疾病——淋病的病原體，它可引起人類生殖器、泌尿道化膿性感 染。目前有許多新技術如ELISA法，熒光抗體法，基因探針及分子雜交法等，但培養法一直是診斷淋病的金標準。隻是其培養要求很高，多依賴進口培養基 ，如 Oxoid公司生產的Gc培養基、T-M培養基、美國生產的 New York培養基等，雖然陽性率得到提高，但定貨費時 ，  價格昂貴。我國基層醫療單位常用桂敏和GC培養基，但存在培養性能不高等缺點，如桂敏培養基較低的分離率等．並不適合在基層推廣。因此，國內外學者對淋球菌培養基做了很多研究，取得了一定成果，但並不是十分滿意。為適應性病防治的需要，我們將自製的一種簡便、經濟、有效、快速的新型淋球菌培養基，與英國產T-M培養基對臨床菌株的分離效果進 行比較；同時 ，就其培養性能穩定效期進行了測試 ，以便進一步推廣應用新型淋球菌培養基結果報告如下。

 

1.材料與方法

1.1培養基

 

T-M 培養基：英國OXIOD公司進口散裝品。新型淋球菌培養基：蛋白腖1.5％，玉米澱粉0.1％，K₂HPO₄0.4％，KH₂PO₄0.1％，NaCl0.5％，瓊脂1％溶解於蒸餾水，121℃高壓滅菌15min後，冷卻到60℃左右，無菌操作按比例加入適當的營養成分和抑菌劑，充分混勻後傾注一次性平皿 。4℃冰箱保存備用，接種前於孵箱預熱 。 

 

1.2生化反應試劑儀器設備

 

氧化酶試驗試劑 ( 購自Sigma公司，自配 )、葡萄糖發酵管 、麥芽糖發酵管、蔗糖發酵管購白杭州天和微生物試劑有限公司

 

1.3標本的采集

采集塗片檢查白細胞內外有G-腎形雙球菌的疑似淋病患者的尿道或宮頸分泌物。 

 

1.4   方法

 

1.4.1鑒定初步簽定：菌落形態 ( 成圓形、凸形，濕潤 )， 

光滑，半透明或者灰白色的菌落，邊緣呈花瓣狀 ．直徑為0.5 ～ 1.0mm，用白金耳觸之有 黏性 ，符合上述特性，氧化酶試驗 ( +) ，G-雙球菌。最後鑒定：發酵試驗 ，葡萄糖 ( +)，乳糖(-) ，麥芽糖(-) ，蔗糖(-) ，22℃及普通瓊脂不生長，可鑒定為淋球菌陽性結果。

 

1.4.2臨床菌株分離陽性率比較    將采集的疑似淋病患者標本373例分別接種於兩種培養基上，置燭缸內 ，點燃蠟燭，蓋密缸蓋 ，置培養箱內35℃～36℃培養24～28h，觀察結果 。

 

1.4.3保存效期比較     將淋球菌菌株10株接種於不保存期新型淋球菌培養基上，置燭缸內，點燃蠟燭，蓋密缸蓋，置培養箱內35℃～36℃培養24h，觀察結果。

 

1.5統計學分析

采用χ²檢驗分析。 

 

2 結果

 

2.1臨床菌株分離陽性率比較

本實驗中，新型淋球菌培養基檢出陽性病例329人，檢出率88.2％：T-M培養基檢出陽性病例323人，檢出率86.6％。  見表 1 。

 

表 1        2種培養基淋球菌臨床菌株分離陽性率比較 (χ10^-2)  

[注]與 T-M培養基相比較 ，*P>0.05差異無統計學意義

 

2.2保存效期比較

實驗表明，在24周時間內，不同保存時間培養基上淋球菌菌落數及菌落大小差異無統計學意義。見表 2 。

 

  表2  新型淋球菌培養基培養性能穩定性測試

[注]與保存4周的新型淋球菌培養基相比較，  *P>0.05 差異無統計學意義

 

3 討 論

    淋球菌培養是診斷淋病的主要依據。常用 T-M培養基由於價格因素、效期等因素而不適用於人數較多的群體和基層檢測，需製作簡單、成本低、原材料易得和培養效果好的培養基 。本研究采用的新型淋球菌培養基係我院中心實驗室自製，成本低、原材料易獲得。在本實驗 中就其培養性能同常用的 T- M 培養基進行了比較。在新型淋球菌培養基上，淋球菌生長良好 ，2 4h培養可見中小菌落生長，其檢出淋球菌陽性率為88.2％，與T-M培養基比較差異無統計學意義( P>0.05 ) ．表明新型淋球菌培養基在培養性能方麵可替代進口的T-M培養基。 

  

    此外，培養法診斷淋病對淋病診治單位而言，必然帶來淋球菌培養基儲備問題。目前 ，我國的淋病診治單位包括了基礎醫院、診所以及大型醫院等。他們彼此的淋病標本多少不等，相差很大。但是，如前所述，進口培養基價格較貴，每人份的成本價在人民幣1 0元左 右 ，即使是珠海進口分裝的MTM選擇培養基也要 8元／個 ；且多采用大包裝 ；同時因受 培養基有效期和貨物運輸周期的影響，從進口到用戶手上，一般都接近失效，因為有效期隻有3個月。這對於標本少的基層醫院而言 ，必然意味著培養基利用效率不高，浪費嚴重。如采用自己配製的辦法，由於培養基配製過程繁瑣，不易質量控製，不為臨床所接受。而本實驗結果表明 ．采用該包裝的新型淋球菌培養基在4 ℃條件下保存6個月後 ，其培養效果仍同新配製的培養基無差異 ( P>0.05) 。因此 ，我們認為，新型淋球菌培養基保存期可 以長達6個月。這對促進中小醫療單位采用培養法診斷淋病起到積極作用。總之，新型淋球菌培養基具有經濟、簡便、培養性能高等優點，可以替代進口的T-M 培養基在基層醫療單位推廣應用 。