1)鑷子類 forceps
規格:可用20cm長的鑷子。鑷子過短.容易使手接觸瓶口,造成汙染。鑷子太長,使用起來不靈活。
特殊用處:如在分離莖尖幼葉時,則用鍾表鑷子。
2)剪刀類 scissors
規格:用15cm長度。主要用於切斷莖段、葉片等。
特殊用處:也可以用彎形剪刀,
3)解剖刀
用處:切割較小材料和分離莖尖分生組織時。
注意:刀片要經常調換,使之保持鋒利狀態,
4)解剖針
用處:可深入到培養瓶中,轉移細胞或愈傷組織。也可用於分離微莖尖的幼葉。
2.3 培養條件
指標:大多數組織培養都是在23-27℃之間進行,一般采用25±2℃。
低於15℃時培養,組織會表現生長停止,高於35℃時對生長不利。
作用:溫度不僅影響組培苗的生長速度, 也影響其分化增殖以及器官建成等發育進程。
差異:不同植物培養的適溫不同。百合的最適溫度是20℃、 月季是25-27℃、番茄是28℃。 不同培養目標采用的培養溫度也不同, 百合鱗片在30℃下再生的小鱗莖的發葉速度和百分率都比在25℃下的高。用35℃處理草莓的莖尖分生組織3-5天,可得到無病毒苗。
組織培養中光照也是重要的條件之一, 主要表現在光強、光質、以及光照時間方麵:
1) 光照強度light intensity 光照強度對培養細胞的增殖和器官的分化有重要影響, 從目前的研究情況看,光照強度對外植體、細胞的最初分裂有明顯的影響。 一般來說,光照強度較強,幼苗生長的粗壯,而光照強度較弱幼苗容易徒長。
2)光質 light wave
光質對愈傷組織誘導,培養組織的增殖以及器官的分化都有明顯的影響。 如百合珠芽在紅光下培養,8周後,分化出愈傷組織。但在藍光下, 幾周後才出現愈傷組織,而唐菖蒲子球塊接種15d後,在藍光下培養首先出現芽,形成的幼苗生長旺盛,而白光下幼苗纖細。
3)光周期 light period
試管苗培養時要選用一定的光暗周期來進行組織培養, 最常用的周期是16h的光照, 8h的黑暗,研究表明,對短日照敏感的品種的器官組織, 在短日照下易分化,而在長日照下產生愈傷組織,有時需要暗培養, 尤其是一些植物的愈傷組織在暗下比在光下更好。如紅花、烏飯樹的愈傷組織。
濕度的影響包括培養容器保持和環境的濕度條件, 容器內主要受培養基水分含量和封口材料的影響。 前者又受瓊脂含量的影響。在冬季應適當減少瓊脂用量, 否則,將使培養基幹硬,以致不利於外植體接觸或插進培養基,導致生長發育受阻。封口材料直接影響容器內濕度情況,但封閉性較高的封口材料易引起透氣性受阻,也導致生長發育受影響。
環境的相對濕度可以影響培養基的水分蒸發, 一般要求70-80%的相對濕度, 常用加濕器或經常灑水的方法來調節濕度。濕度過低會使培養基喪失大量水分,導致培養基各種成分濃度的改變和滲透壓的升高,進而影響組織培養的正常進行;過高時,易引起棉塞長黴,造成汙染。
培養基中添加的鹽類、 蔗糖、甘露醇及聚乙二醇類高分子化合物,影響到滲透壓的變化。1~2個大氣壓對生長有促進作用,2個大氣壓以上就對生長有阻礙作用, 5~6個大氣壓生長就完全停止,6個大氣壓細胞就不能生存。
不同的植物對培養基最適pH值的要求也是不同的(表2-1),大多在5~6.5左右,一般培養基皆要求5.8,這基本能適應大多植物培養的需要。
氣體gas
氧氣是組織培養中必需的因素, 瓶蓋封閉時要考慮通氣問題,可用附有濾氣膜的封口材料。 通氣最好的是棉塞封閉瓶口,但棉塞易使培養基幹燥, 夏季易引起汙染。固體培養基可加進活性炭來增加通氣度,以利於發根。培養室要經常換
氣,改善室內的通氣狀況。液體振蕩培養時,要考慮振蕩的次數、振幅等,同時要考慮容器的類型、培養基等。
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