一、 準備工作
1、 緩衝液1×TSS的配製：
事先配製1M的氯化鎂——20.3g氯化鎂(6分子水結晶)/定容於100ml去離子水後封裝，不用滅菌。
取幹淨的100ml 量筒和100ml 燒杯，用量筒量取100ml去離子水，加入至燒杯中，取 1 g 蛋白腖，0.5g酵母抽提物，0.5g氯化鈉，10 g PEG(MW= 3350), 5ml DMSO，5ml 的1 M氯化鎂，溶解後用鹽酸或者氫氧化鈉調整pH為6.5，混勻後用0.22um 濾器過濾除菌。儲存在4度，保質期約6個月。
2、已劃平板（或者用槍頭沾取並稀釋後塗布）並在培養箱中過夜培養的菌種——Dh5α，用於接種並振蕩培養。.兩個錐形瓶，分別裝有30 ml和50mlLB，滅菌後置於4℃冰箱備用。
3、 若幹已滅菌的瓊脂平板，一個未加抗生素，用於第二步的接種。其餘做轉化用。
二、 感受態製備程序：
1、前一天晚上調單菌落至30 mlLB中過夜培養（12-16h）,按1：100 比例將過夜培養的菌液（500ul）加入到新鮮的50 ml LB培養液中，於37 ℃振蕩培養至OD600約為0.4(培養時間2h40～50min)。冰浴30分鍾後4度1000g離心10min，棄上清，收獲細菌。加入原體積十分之一（這裏為5 ml）的1× TSS 液(冰預冷)懸浮細胞，然後分裝成100 ul/份，全部冰上操作，－80度保存。
三、 轉化時取一管（100 ul）感受態細菌，（凍寸細胞應置於冰上緩慢融化後立即使用）加入3-5ul DNA（0.1～100ng），輕輕混勻後冰浴30min。加入0.9ml含20mmol/L葡萄糖的LB培養液，37度150r/min溫和振蕩培養60min，塗布，室溫放置約20分鍾後放於37度恒溫培養箱過夜培養（17-20h）。
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