國際目前耐熱大腸菌群的檢驗方法主要有四種,NMKL有兩個,分別針對不同產品,ISO有兩個,僅適用於水的檢驗。下麵以出口水產品中耐熱大腸菌群的檢驗方法(根據NMKL、N96、1994方法整理)為例進行介紹。
1.適用範圍:新鮮和冷凍水產品,包括魚、魚製品、貽貝、貽貝製品、貝類及貝類製品。
2.培養基和試劑:
1)生理鹽水
氯化鈉 8.5克
蒸餾水 1000mL
分裝10mL管後,121℃滅菌15min。
2)月桂基硫酸鹽肉湯
胰多腖 20克
乳糖 5克
氯化鈉 5克
磷酸氫二鉀 2.75克
磷酸二氫鉀 2.75克
月桂基硫酸鹽 0.1克
蒸餾水 1000mL
分裝每管10mL,內加童漢氏管,121℃滅菌15min,滅菌後pH為6.8±0.2。
3)EC肉湯
胰多腖 20克
乳糖 5克
氯化鈉 5克
磷酸氫二鉀 4克
磷酸二氫鉀 1.5克
蒸餾水 1000mL
分裝每管10mL,內加童漢氏管,121℃滅菌15min,滅菌後pH為6.8±0.2。
3.操作步驟:
3.1樣品處理:取不同部位漁產品剪碎,稱取25克於225mL滅菌生理鹽水中,充分搖勻。取上清夜1mL用滅菌生理鹽水做梯度稀釋。其它樣品依此方法稀釋。
3.2推測實驗:取3個連續濃度的稀釋液1mL接種內盛10mL滅菌月桂基硫酸鹽肉湯的試管,於37±1℃培養兩天,觀察童漢氏管內是否有氣泡產生。
3.3確證實驗:將4.2中產氣的試管接種至EC肉湯中,於44.5±0.2℃培養,24h天內產氣的判為陽性。
3.4結果:根據4.3中的陽性管數,查MPN表(參見SN0169-92附錄)確定每克原始樣品中的耐熱大腸菌群數。
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