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黴菌標本製備及形態觀察



錄入時間:2011-8-11 9:12:47 來源:百度

 

目的要求

學習黴菌的標本製備方法,觀察根黴、毛黴、青黴、曲黴、白地黴的形態構造。

材料

1. 菌種:白地黴(Ceotrichum candidum)搖瓶培養液;根黴(Rhizopus sp.)、毛黴(Mucorsp.)、曲黴(Aspergillus sp.)、青黴(Penicillium sp.)平板。

2. 染料:乳酸石炭酸棉藍液。

3. 其他:顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環、解剖針、培養皿、玻璃棒、濾紙、20%甘油。

原理

黴菌菌絲較大,細胞容易收縮變形,孢子容易飛散,在製備黴菌標本時,常用乳酸石炭酸溶液作為介質,具有不使細胞變形,可殺菌防腐,不易幹燥,能保持較長時間等優點,若加入棉藍,又具有一定染色效果。

黴菌的有些結構在製片過程中易被破壞,影響觀察,可采用載玻片培養法。此法便於直接顯微鏡下觀察,尤其適用於根黴的假根,曲黴的足細胞及分生孢子鏈等結構的生長情況的觀察,並且還可在同一標本上觀察到微生物發育的不同階段的形態。

方法

1.白地黴的觀察

取一塊幹淨的載玻片,加一滴白地黴培養液,加蓋玻片製成水浸標本片,在顯微鏡下觀察白地黴菌絲及節孢子的形態。

2.其他黴菌觀察

1)一般觀察法:加一滴乳酸石炭酸棉藍液於潔淨的載玻片中央,用解剖針從菌落的邊緣處挑取少量帶有孢子的菌絲,放入乳酸石炭酸棉藍液中,再細心地把菌絲挑散開,加蓋玻片,注意不要有氣泡產生。置於顯微鏡下觀察,菌絲呈藍色,顏色的深度隨菌齡的增加而減弱。

觀察根黴時,注意觀察其菌絲(無橫隔)、假根、孢子囊柄(與假根相對著生)、孢子囊、囊軸、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。

觀察毛黴時,注意觀察其菌絲(無橫隔)、孢子囊柄、囊軸、孢子囊孢子及厚垣孢子。

觀察曲黴時,注意觀察其菌絲(有橫隔)、足細胞,分生孢子梗、頂囊、小梗(形狀、層數及在頂囊上的著生情況),分生孢子的著生情況。

觀察青黴時,注意觀察其菌絲(有橫隔),分生孢子梗,帶狀枝(小梗的輪數及對稱性),分生孢子的著生情況。

2)載玻片培養法:

①濕室準備:在培養皿底部先放一張圓形濾紙,在濾紙上依次放上“Z”型玻璃棒、載玻片和蓋玻片(兩片),蓋上培養皿蓋,用紙包紮好,高壓(9.8×104Pa)滅菌20分鍾。

②用接種環挑取少量黴菌孢子,置於濕室的載玻片的中央,用無菌滴管滴加少量冷卻至45左右的察氏培養基。

③將鑷子在火焰上灼燒滅菌後,取無菌蓋玻片蓋在培養基上,然後輕輕壓一下。用滴管取融化的石蠟將蓋玻片的三邊密封,如圖19-1-1)所示。

④將35m1 20%甘油倒於濕室內,以保持濕度,如圖19-1-2),將培養皿置於28恒溫箱中培養2天。

⑤將培養好的載玻片取出,置於顯微鏡下觀察。

 

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