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1.樣品采集後應盡快檢驗，若不能及時檢驗，可在2℃～5℃保存；如8 h內不能進行檢驗，應以無菌操作稱取25 g（mL）樣品加入等量緩衝甘油-氯化鈉溶液（液體樣品應加雙料），並盡快至於-60℃低溫冰箱中冷凍保存或加幹冰保存。
注意事項：產氣莢膜梭菌為厭氧菌，暴露在空氣中易死亡，因此從稱樣、製備樣液、稀釋、到傾注培養基進行培養整個過程要快速完成，如不能及時完成，可按標準要求置於2-5℃保存(數小時內)或加入緩衝-甘油氯化鈉溶液置於-60℃冷凍保存。
2.以無菌操作稱取25 g（mL）樣品放入含有225 mL 0.1%蛋白腖水（如為1中冷凍保存樣品，室溫解凍後，加入200 mL 0.1%蛋白腖水）的均質袋中，在拍擊式均質器上連續均質1 min～2 min；或置於盛有225 mL0.1%蛋白腖水的均質杯中，8 000 r/min～10 000 r/min均質1 min～2 min，作為1:10稀釋液。
3.以上述1:10稀釋液按1 mL加0.1%蛋白腖水9 mL製備10-2～10-6的係列稀釋液。
4.吸取各稀釋液1 mL加入無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平行。每個平皿傾注冷卻至50℃的TSC瓊脂（可放置於50 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中保溫）15 mL，緩慢旋轉平皿，使稀釋液和瓊脂充分混勻。
注意事項：注意傾注時的培養基溫度和時間，培養基溫度過高或操作時間過長都有可能導致產氣莢膜梭菌死亡;
5.上述瓊脂平板凝固後，再加10 mL冷卻至50℃的TSC瓊脂（可放置於50℃±1℃恒溫水浴箱中保溫）均勻覆蓋平板表層。
注意事項：部分產氣莢膜梭菌若生長在培養基表麵時會因產生的硫化氫逃逸，菌落呈現無色，導致漏檢，覆蓋培養基則可以留住硫化氫與培養基中的鐵鹽反應生成黑色的FeS，使菌落呈現黑色，因此必須要進行覆蓋操作。
6.待瓊脂凝固後，正置於厭氧培養裝置內，36℃±1℃培養20 h～24 h。
7.典型的產氣莢膜梭菌在TSC瓊脂平板上為黑色菌落。