雙抗巧克力瓊脂培養基

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雙抗巧克力瓊脂培養基用於嗜血杆菌和奈瑟氏菌等苛養菌的培養，需要加入脫纖維羊血和萬古黴素，多粘菌素B進行製備。
1.按照產品標簽說明，稱取8.8 g雙抗巧克力瓊脂幹粉。
2.倒入盛有200 mL純化水的搪瓷缸中，然後用玻璃棒不停攪拌，直到幹粉完全溶解。
3.之後將搪瓷缸放置於電磁爐上，一邊加熱，一邊攪拌，當液麵完全沸騰後，立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開，為第一次煮沸，當液麵回落後立即放回電磁爐加熱，重複加熱煮沸，共煮沸2-3次，之後倒入三角瓶中，包好。
4.放置於高壓滅菌鍋中，121℃滅菌15分鍾。
5.滅菌結束後，取出培養基，待培養基冷至50℃左右時，用移液槍吸取14 mL無菌脫纖維羊血（添加量為7%），緩慢加入三角瓶中，不斷搖晃使其與培養基充分混勻；將三角瓶放置於80℃水浴中加熱10 min左右，不停搖動，直至培養基顏色變成棕色（巧克力色）。
6.待培養基冷至45℃-50℃時，用移液槍吸取一支雙抗巧克力瓊脂添加劑（含萬古黴素0.66 mg，多粘菌素B 0.84 mg），緩慢加入三角瓶中，並不斷搖晃使其與培養基充分混勻，傾入無菌平皿，備用。
7.配製好的雙抗巧克力平板應為巧克力色固體，表麵平整。
檢驗原理
雙抗巧克力瓊脂培養基用於嗜血杆菌和奈瑟氏菌等苛養菌的培養，各種消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、維生素和生長因子；澱粉能促進奈瑟氏菌的生長；氯化鈉維持均衡的滲透壓；多粘菌素、萬古黴素抑製了革蘭氏陽性菌的生長，更有利於嗜血杆菌和奈瑟氏菌的生長；瓊脂是培養基的凝固劑；脫纖維羊血提供氯化血紅素和輔酶I，血液中還含有V、X因子，這兩種因子是位於紅細胞中的，一般細菌不能利用，輕微的加熱（一般為75℃~85℃左右）使紅細胞破壞釋放出V、X因子。
注意事項
1.無菌脫纖維羊血必須提前從冰箱中取出，待其恢複至室溫後使用。
2.加入羊血和抗生素時需注意不斷搖晃三角瓶，使其與培養基充分混勻。
3.80℃水浴中加熱後可以不加雙抗巧克力瓊脂添加劑（含萬古黴素0.66 mg，多粘菌素B 0.84 mg），直接倒平板，即為巧克力瓊脂平板，也可用於培養苛養菌。